医生根据典型临床表现和梅毒血清学实验结果诊断本病。临床表现有不洁性生活史或梅毒接触史。男性于阴茎冠状沟、龟头、包皮及系带等处，女性于大小阴唇及宫颈等处出现硬下疳：直径1~2厘米，圆形或椭圆形无痛性溃疡，周边水肿并隆起，基底呈肉红色，触之具有软骨样硬度。硬化性淋巴结炎：单侧腹股沟处可触及肿大的淋巴结，质地较硬，表面无红肿破溃，一般不痛。梅毒血清试验检查是主要的检查方法和确诊的主要依据。非特异性试验如RPR，为梅毒的诊断筛选试验，阳性结果时可初步诊断。一期梅毒硬下疳出现后的2～3周内，可出现假阴性。特异性血清学试验如TPPA，即梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性结果可以确诊。常呈持久阳性，不可用于观察和判断疗效。